Name: CHO瞬转蛋白表达培养基
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CHO瞬转蛋白表达培养基

FastTrans CHO 瞬转表达基础培养基（Basal Medium）与补料培养基（Feed Medium）是完全化学成分限定（Chemically Defined），均不含血清、水解物及任何动物来源的成分，适合于不同亚型中国仓鼠卵巢细胞（CHO-K1 和 CHO-S细胞）的高密度悬浮培养，可实现重组蛋白和抗体的高水平表达。

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产品概述

订购信息

试剂盒	产品名称	货号	规格	适用场景
FastTrans CHO Kit	FastTrans 基础表达培养基	CFCD01.001	1000mL/瓶，含谷氨酰胺	ExpiCHOS, K1等
	FastTrans CHO补料培养基	CFFM01AB.010	100mL/瓶
	FastTrans CHO补料培养基	CFFM02AB.010	50mL/瓶
	Titer Enhancer	Enhancer.001	5mL/瓶，1瓶
	脂质体转染试剂	CFTrans.001	7mL/瓶，1瓶
	PEI转染试剂	CFTrans.002	10mL/瓶，0.5mg/mL

使用说明

步骤	使用方法
细胞传代	0.3 e6 cells/mL 接种，3天传代一次，当细胞倍增时间不低于对照培养基时认为细胞完全适应新培养基，进入下一步骤；
转染前一天	细胞密度调整到 2e6 cells/mL（很重要）
转染步骤	以 20mL 培养体积为例（其他培养体积，相关试剂需要按体积折算） 1：转染当天用新鲜培养基稀释细胞密度至~6e6 cells/mL (采用离心换液方法更佳)； 2：将 50μg 质粒（即质粒总量 2.5μg/mL左右）滴加到培养基中; 3: 缓慢滴加推荐比例的转染试剂至培养基中，边滴加边混合，使混合物能均匀扩展； 4: 摇瓶放入摇床中，培养时间记为 Day0, 转染结束；
质粒	使用高纯低内毒素质粒提取试剂盒，可提高转染效果；按照推荐的质粒与转染试剂的比例添加；
补料培养	1 ：转染后~24h 补加 0.3%的 CHO enhancer （仅此一次）和 9%的 CFFM02AB 补料培养基及 6g/L的葡萄糖，并降温至 32℃培养； 2 ：之后 Day 5 和 Day9: 每 4天补加一次 9%的 CFFM02AB 补料培养基（若只培养 6-7天，Day5 不需要补料）; 3 ：活力≤60%或按既定时间即可培养结束；
温度及其他参数	1 ：初始 37℃ , 转染~24时降温至 32℃; 2 ：摇床转速 120rpm, 50mm 振幅（重要参数，转速低或振幅低会影响溶氧导致产酸，降低表达量），5-8% CO₂； 3 ：摇瓶装液量推荐 15~20%；

产品运输和存储

运输：常温或冷链运输；

存储：2~8℃，避光保存；

有效期：1年（开封后建议在3个月内使用完）。

应用范围

Celfort (思尔赋)培养基可用于 CHO 细胞冻存、复苏、传代、高密度强化工艺培养及灌流培养，可实现细胞快速生长，维持细胞高活率及蛋白该表达。

使用指南

细胞冻存

1 ．准备处于对数生长期状态较好的细胞，且细胞活率在 90%以上；

2 ．检测活细胞密度，计算所需的冻存培养基体积，计算最终细胞密度 1~ 1.5×107 cells/mL；

3 ．准备好所需的冻存培养基：90%表达基础培养基+10% DMSO ，2~8℃冷藏保存；

4 ．设置离心力 200×g ，离心 5 min ，用冻存培养基重新悬浮细胞至冻存体积；

5 ．将悬浮细胞等分保存至适宜规格的细胞冻存管中；

6 ．将细胞冻存管置于程序降温盒中，按照降温标准进行降温；

7 ．将细胞转移到液氮罐中保存。

细胞复苏

1 ．提前打开水浴锅，并设置温度至 36.5℃~37.0℃;

2 ．将细胞从液氮罐中移出后，快速在水浴锅中融化冷冻的细胞（＜3min）；

3 ．将冷冻管中的细胞液全部转移到125 mL含有30 mL 预温过的基础培养基的摇瓶中；

4 ．置于36.5~37.0℃ , 5~8% CO₂ ，转速 120 rpm（轨道振幅 50 mm）的摇床中培养；

5 ．细胞至少传代 2 次，待细胞完全复苏且活率在 90%以上，可按计划进行后续操作。

细胞传代

1 ．将基础培养基放入36.5~37.0℃条件下预热 20 min；

2 ．检测活细胞密度，按接种密度为 0.3×10⁶ cells/mL 的最终传代体积，计算所需种子液量；

3 ．无菌转移所需量的种子液，添加至含所需体积的已预热的基础培养基的摇瓶中；

4 ．将摇瓶放入温度36.5~37.0℃ , 120 rpm（振幅50mm）（摇瓶底面积增大，需减小摇床转速）， 5%~8% CO₂的细胞培养摇床中进行培养；

5 ．每3天用新鲜的培养基按上述步骤进行传代培养。

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